Hello，科研小达人们！
本日禀享的是WB实验中的关键步骤——全蛋白提取。想要得到高质量的蛋白样品，避免蛋白分解，以下两种方法及把稳事变，你一定不能错过！
方法一：RIPA裂解法步骤详解：1、准备10cm培养皿中长满的细胞；2、用预冷PBS洗濯细胞1-2次，弃去PBS；3、加入1mL PBS，用细胞刮刀轻轻刮取细胞，确保无遗漏；4、离心后弃去PBS，准备RIPA裂解液稠浊PMSF（100:1），磷酸化蛋白还需加入磷酸酶抑制剂（100:1:1）；5、将裂解液加入EP管中，4℃裂解15min；6、超声破碎细胞，保持低温；7、离心后取上清，加入5x loading buffer，金属浴中变性；8、将变性蛋白存于-80℃冰箱。方法二：PBS裂解法步骤详解：1、同样准备长满的细胞；2、洗濯细胞，弃去PBS；3、配制PBS与5X loading buffer的裂解液，加入PMSF及磷酸酶抑制剂；4、将裂解液加入大皿中，4℃裂解15min；5、刮取细胞，移至EP管；6、变性蛋白并存放于-80℃冰箱。把稳事变：1、裂解至变性过程保持4℃，防止蛋白降解；2、加入裂解液时，轻轻奏乐混匀；3、粘稠样品可适量增加裂解液；4、蛋白保存温度选择-20℃或-80℃，避免频繁冻融；5、只管即便不用胰酶消化，以免影响膜蛋白；6、细胞不宜过满，以免影响蛋白表达。 小贴士：1、蛋白质的稳定性和活性是实验成功的关键，细节决定成败哦！
2、记得实验前后都要做好准备事情，确保每一步都精确无误。 总结：节制这两种全蛋白提取方法，你的WB实验将更加得心应手。记得实验过程中要细心耐心，一步步来，成功就在面前！
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